PCR法检测粪便样本溶组织内阿米巴的初步研究

目的 建立直接检测粪便样本中溶组织内阿米巴的PCR方法 .方法 根据溶组织内阿米巴标准株基因组中小亚基核糖体RNA (small subunit ribosome RNA,SSU rRNA)序列合成4对特异性引物(2对自主设计引物和2对参考引物),建立PCR检测方法,用该方法对221例临床腹泻患者粪便标本进行检测,同时采用病原学碘染涂片镜检法和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗原,对3种方法的阳性率进行比较,并采用Kappa检验进行一致性分析,分析3种检测方法 结果 的准确性.结果 4对引物均扩增出溶组织内阿米巴特异的目的片段,建立了粪便样本溶组织内阿米巴检测的PCR法.选择其中2对引物(1对自主设计引物和1对参考引物)对221例粪便样本进行PCR扩增,同时用碘染涂片镜检法查病原体,用ELISA法进行抗原检测,3种方法溶组织内阿米巴阳性检出率分别为2.26％、0.90％和9.50％,差异有统计学意义(x2=23.34,P＜0.01).PCR法与碘染涂片镜检法比较,Kappa值为0.216,一致性微弱;PCR法与ELISA法比较一致性差,Kappa值为-0.134.PCR法的结果与临床诊断的一致性最好.结论 本研究通过自行设计引物建立的粪便样本溶组织内阿米巴PCR检测法在准确性上优于镜检法和ELISA抗原检测法,为该方法用于临床诊断提供了实验基础.