高效液相色谱法测定生物转化反应液中N,N'-乙二胺二琥珀酸

建立了高效液相色谱测定生物转化反应液中N,N'-乙二胺二琥珀酸(EDDS)含量的分析方法.采用Inert-Sustain AQ-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以体积分数25％的甲醇水溶液(含有1.0 g/L一水乙酸铜、2.0 g/L四丁基氢氧化铵,以磷酸调节pH至2.80)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为20μL,检测波长为254 nm.该方法可在8 min内分离EDDS及其生物合成相关物质(苹果酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)和富马酸),且峰形良好.EDDS在0.06～0.6 g/L范围内线性线性关系良好(相关系数(r)为0.9995),平均回收率为100.39％(n=9,RSD=1.15％).EDDS生物合成反应液中EDDS含量为0.25 g/L,大部分底物被转化为苹果酸(36.56 g/L);而EDDS的水解反应中富马酸产生较少,形成了3.05 g/L的苹果酸.该方法简便快速,灵敏可靠,适用于EDDS生物合成的研究.