改构人源化免疫促凋亡蛋白的表达及对HER2阳性肿瘤细胞的特异杀伤作用

目的 哺乳动物细胞表达切割位点改构的人源化免疫促凋亡蛋白,验证其对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性肿瘤细胞的杀伤作用.方法 将Kozak序列、人源化抗HER2单链抗体P1h3、Fc标签、组织蛋白酶D切割位点D1和促凋亡效应分子tBid基因依次连接,克隆入真核表达载体pLVX-EGFP;转染HEK293F细胞,Western blot法鉴定培养上清中目的蛋白的分泌表达;通过显微镜观察计数和萤光素酶活性检测法,验证目的蛋白对HER2阳性PC9肺癌细胞的杀伤作用.结果 成功构建真核表达载体pLVX-P1 h3-Fc-D1-tBid-EGFP;转染HEK293F细胞后,Western blot结果证明培养上清中有目的蛋白表达;杀伤实验结果显示目的蛋白可以显著诱导HER2阳性PC9细胞死亡.结论 哺乳动物细胞表达的改构人源化免疫促凋亡分子可以特异性杀伤HER2阳性肿瘤细胞.