单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体开放读码框3对Vero细胞凋亡的影响

目的 研究单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框3(ORF3)对顺铂诱导的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)凋亡的影响.方法 构建重组质粒pEGPF-ORF3,并转染Vero细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证目的基因的表达.顺铂诱导Vero细胞凋亡,通过荧光显微镜观察凋亡小体,Giemsa染色检测细胞核形态,噻唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡情况.实验结果采用SPSS13.0进行分析,各组间两两比较采用单因素方差分析和t检验.结果 成功克隆HSV-2 333株ORF3基因,构建pEGFP-ORF3真核表达载体,RT-PCR验证该真核表达载体能在Vero细胞中高效表达.转染pEGFP-ORF3的Vero细胞经顺铂诱导凋亡后Giemsa染色,显示胞核蓝染,胞质淡浅,细胞形态正常.MTT法分析显示,细胞增殖在转染pEGFP-ORF3组(2.56±0.21)与未经任何处理的正常对照组(2.66±0.13)比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但高于顺铂诱导凋亡的正常对照组(1.65±0.11)和pEGFP-C2组(1.56±0.18),差异均有统计学意义(P＜0.05)；流式细胞仪分析细胞凋亡率,转染pEGFP-ORF3组(4.03％±1.04％)与正常对照组(2.13％±0.09％)比较,差异无统计学意义(P＞0.05),但低于空质粒pEGFP-C2组(19.45％±2.05％),且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HSV-2 LAT ORF3在Vero细胞中具有抗顺铂诱导的凋亡作用.