桔皮素抑制破骨细胞分化和钛颗粒诱导的骨溶解

目的 观察桔皮素对破骨细胞形成和骨吸收功能的影响.方法 分离纯化C57BL/6小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMMs),加入不同浓度的桔皮素共培养,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测桔皮素细胞毒性.采用巨噬细胞集落细胞刺激因子(M-CSF)和核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导原代骨髓单核-巨噬细胞向破骨细胞分化.对照组不加桔皮素,实验组加入不同浓度(3.125、6.250 μmol/L)的桔皮素共培养,破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞数目,牛骨片培养并用扫描电镜扫描分析骨凹陷面积以评估其骨吸收功能.将20只8周龄的C57/BL6小鼠随机分成平均4组(每组5只):假手术组、对照组、低浓度药物组(每天10 mg/kg)、高浓度药物组(每天20 mg/kg).除假手术组,其他3种均采用钛颗粒建立颅骨的骨溶解模型,药物组腹腔注射不同浓度的桔皮素.14d后Micro-CT扫描颅骨标本,评估桔皮素对小鼠颅骨的骨溶解作用.应用SPSS 19.0统计软件分析,数据以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验.结果 桔皮素对BMMs的毒性呈浓度依赖,6.250、12.500、25.000 μmol/L桔皮素浓度下的细胞活力与对照组差异均无统计学意义(P＞0.05).桔皮素浓度不超过25.000 μmol/L时对细胞没有毒性.桔皮素3.125 μmol/L组(t=7.181,P＜0.01)和6.250 μmol/L组(t=16.058,P＜0.01)的破骨细胞数较对照组均显著减少.桔皮素3.125 μmol/L组(t=9.497,P＜0.01)和6.250 μmol/L组(t=15.781,P＜0.01)的骨凹陷面积较对照组均显著减少.体内实验结果显示,与假手术组比较,对照组出现了显著的颅骨骨溶解(t =10.911,P＜0.01).与对照组比较,低浓度桔皮素组(t=9.487,P＜0.01)和高浓度桔皮素组(t=10.333,P＜0.01)的骨溶解程度均得到显著抑制,且高浓度桔皮素组的骨溶解程度显著低于低浓度组(t=4.032,P＜0.01).结论 桔皮素可以抑制破骨细胞形成及其骨吸收功能.