高分辨率熔解曲线分析在成骨不全相关基因突变筛查中的应用

目的 探讨高分辨率熔解曲线分析(HRMA)在成骨不全(OI)相关基因突变筛查中的应用价值.方法 收集2012年3月至12月于天津医院住院的5例OI患儿临床资料.采集患儿、有家族史患儿父母及查体健康者(正常对照)血液标本,PCR-HRMA筛查患儿COLlAl/COLlA2基因所有外显子及其侧翼序列,基因测序确定突变位点.有家族史患儿父母基因测序进行验证.结果 PCR-HRMA显示,5例患儿分别在COL1 A1基因11、39、8外显子及COLlA2基因19外显子区域结果异常,患儿熔解曲线与正常对照比较存在差异,提示患儿基因变异,标准熔解曲线显示患儿基因型均为杂合子.5例患儿基因测序结果分别为COLlA1基因c.768dupC、c.2644C＞T、c.635G＞A以及COLl A2基因c.982G＞A、c.948C＞T.患儿1、2基因突变导致提前形成终止密码子,临床诊断均为Ⅰ型OI.患儿3、4基因突变均使α螺旋结构域甘氨酸(Gly)被替代,临床诊断为Ⅳ型OI.患儿5基因变异未造成氨基酸的改变,该变异不是导致OI的原因,可能的致病原因有待研究.结论 PCR-HRMA因具有成本低、操作简便快速、高通量、无污染等优势,成为OI基因筛查有效的新方法.COL1A1基因突变c.768dupC为新发现的突变位点.