中东呼吸综合征冠状病毒刺突蛋白受体结合区蛋白的原核表达纯化及鉴定

目的：对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)刺突蛋白受体结合区(RBD)蛋白进行原核表达、纯化与鉴定及抗原性初步研究。方法人工合成密码子优化的 MERS-CoV RBD 编码基因,克隆至 pET30a(+)载体,构建重组表达质粒,转化至 BL21(DE3)。利用 IPTG 诱导,探索优化表达条件,并用镍离子亲和层析纯化,SDS-PAGE 和 Western blot 进行鉴定,并采用间接 ELISA 对原核表达的 RBD 进行抗原活性和特异性初步分析。结果重组 RBD 蛋白主要以包涵体形式表达,以37℃0.5 mmol/ L IPTG 诱导4 h 表达量最高；变性复性后纯化获得了较纯的重组 RBD 蛋白,相对分子质量大小约为29×103,与预期一致；Western blot 表明其能与感染 MERS-CoV 的小鼠血清发生特异性反应；间接 ELISA 显示原核表达 RBD 蛋白在检测正常和 MERS-CoV 感染患者血清方面表现出较好的抗原活性和特异性。结论本研究首次利用原核表达系统成功表达并纯化获得重组 MERS-CoV RBD 蛋白,为 MERS-CoV 的免疫学检测及疫苗学研究提供了基础。