猴痘病毒特异性单克隆抗体制备及鉴定

目的 制备猴痘病毒特异性单克隆抗体,建立猴痘病毒免疫荧光检测方法.方法 原核表达猴痘病毒A29蛋白及与之同源的痘苗病毒A27蛋白和牛痘病毒162蛋白,建立抗体筛选系统;使用人工合成的猴痘病毒A2917~49 多肽免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞通过融合、克隆和筛选等制备猴痘病毒单克隆抗体.通过ELISA法确定单克隆抗体的特异性及亚型.结果 在大肠埃希菌中成功表达A29、A27及162蛋白,经Western blot鉴定分子量与预期相符,带his标签的三种蛋白经His-Bind亲和层析柱纯化后纯度均大于90%;用纯化蛋白筛选获得8株A29蛋白特异的单克隆抗体,其中两株为IgG3型,其余为IgG1型.结论 本研究获得8株猴痘病毒特异性单克隆抗体,为进一步建立猴痘病毒免疫荧光检测奠定基础.