结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药相关分子特征分析

目的：探讨结核分枝杆菌（ Mycobacterium tuberculosis，MTB）吡嗪酰胺（ pyrazinamide， PZA）耐药表型与耐药相关基因pncA的关系，对未发现pncA突变的菌株进行panD、rpsA基因分析。方法采用MGIT960仪器法检测108株结核分枝杆菌临床分离株对一线抗结核药物（包括PZA）的敏感性，采用PCR DNA测序技术对菌株进行16S rDNA和pncA、panD、rpsA基因扩增及序列分析。结果78株耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）及利福平单耐菌株中PZA耐药47株（60％），30株对一线抗结核药物（乙胺丁醇、异烟肼、利福平、链霉素，简称EIRS）敏感的菌株中PZA耐药4株（13％），耐药结核分枝杆菌中PZA耐药率显著高于EIRS敏感株。51株PZA耐药MTB菌株中49株（96％） pncA基因发生了突变，57株PZA敏感株中4株（7％）发生突变， PZA耐药株pncA基因突变率显著高于PZA敏感株。 PZA耐药菌株的pncA基因改变以碱基置换为主，His57 Asp氨基酸改变较为常见。碱基突变区域集中在160～169、203～289、309～396和413～467。 pncA基因突变序列分析发现7个新的突变位点：T175 C、C188 A、68位碱基插入G、235位碱基插入AGC、339位碱基插入C、392位碱基插入CC、395位碱基缺失GT。 PZA敏感菌株中发现的4个pncA基因突变位点与耐药株突变位点均不相同。 PZA表型耐药但pncA基因及上游调控序列无突变的菌株NJ108存在panD G419A突变，但rpsA基因为野生型。结论耐药结核分枝杆菌中PZA耐药率较高。吡嗪酰胺耐药结核分枝杆菌中pncA基因突变较为常见，panD基因突变的出现亦值得关注。