寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒三重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

目的 建立一种可以同时鉴别寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒的检测方法.方法 通过全球共享数据库中检索下载寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒全基因组序列进行比对分析,估计其保守区,确定靶基因位置,针对这3种病毒分别设计特异性引物和探针,建立三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对方法的特异性、灵敏性和重复性进行评估.结果 所建立实时荧光定量RT-PCR检测方法可检出寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒模拟样本,最低检出限分别为寨卡病16.22拷贝/PCR,基孔肯雅病毒12.02拷贝/PCR,马雅罗病毒体外转录RNA为2.82拷贝/PCR,三重组合检测与3种病毒分别单重检测,灵敏度无明显差别.与登革病毒、汉坦病毒、SFTS病毒、黄热病毒和流感病毒等无交叉反应,检测100份健康人体检血清样本未见非特异性反应,特异性为100％.重复性结果显示,通过选取高、中、低3个不同浓度梯度的病毒核酸或体外转录RNA,3种病毒的标准差均控制在0.5以内,变异系数在2％以下.结论 建立了寨卡病毒、基孔肯雅病毒和马雅罗病毒的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法,该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性.