NSC23766、Y-27632对3D水凝胶中胶质瘤细胞侵袭迁移及整合素表达的影响

目的 观察分别及联合抑制Rac及Rho通路后3D水凝胶中恶性胶质瘤细胞的侵袭迁移运动形式与整合素表达的变化. 方法 应用脂质体介导pCMVLifeAct-TagGFP2质粒转染U87细胞,将转染后细胞分为NSC23766处理组、Y-27632处理组、NSC23766和Y-27632联合处理组、空白对照组,前3组分别加入100 nmol/mL NSC23766、10 nmol/mLY-27632、100 nmol/mLNSC23766+10 nmol/mL Y-27632,空白对照组加入等量培养基.将4组细胞在水凝胶中进行3D培养,共聚焦显微镜观察4组中类圆形细胞、梭形细胞的组成及间质运动和变形虫运动形式的转换;将接种了4组细胞的水凝胶注入细胞趋化载玻片中,于活细胞工作站观察4组细胞的侵袭迁移运动形式并计算运动速度、运动距离;免疫荧光染色观察4组细胞整合素oV33的表达. 结果 3D水凝胶培养的U87细胞具有类梭形、类圆形2种形态,相应地表现为间质运动和变形虫样运动形式.与空白对照组比较,NSC23766处理组中类圆形细胞所占比例较高,Y-27632处理组中梭形细胞所占比例较高,差异均有统计学意义(P＜0.05).NSC23766处理组细胞的间质-变形虫运动(MAT)转换率为50.0％,Y-27632处理组变形虫-间质运动(AMT)转换率为42.8％.趋化实验结果显示NSC23766处理组、空白对照组、Y-27632处理组、NSC23766和Y-27632联合处理组细胞的运动速度和运动距离依次降低,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光染色检测显示Y-27632处理组细胞整合素αVβ3表达显著高于其他3组,空白对照组细胞整合素αV33表达显著高于NSC23766处理组和联合处理组. 结论 3D水凝胶可以作为U87细胞培养及三维形态观察的良好基质,Rac1与RohA通路靶向抑制剂的联合应用可作为控制脑胶质瘤播散的策略.