急性期川崎病患者p300-TIP60/Sirt1与Foxp3蛋白乙酰化的相关性研究

目的：探讨p300-TIP60/Sirt1对急性期川崎病( KD) Foxp3蛋白乙酰化的影响及其在KD免疫发病机制中的作用。方法急性期KD患儿38例,正常同年龄对照组32例,KD患儿分别于丙种球蛋白( IVIG)治疗前、后直接取血备检。采用免疫共沉淀-印迹法检测外周血CD4+T细胞Foxp3蛋白乙酰化及p300、TIP60和Sirt1结合水平；流式细胞术检测外周血CD4+CD25highFoxp3+细胞(Treg)比例及Foxp3、pAMPK、p300、TIP60、Sirt1蛋白表达水平；实时荧光定量PCR检测Treg细胞细胞毒T淋巴细胞相关抗原4( CTLA-4)、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体( GITR )、IL-10、肝激酶 B1(LKB1)、烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)、早期生长应答因子-1(EGR-1)、转化生长因子β受体-1(TGF-βRⅠ) mRNA表达；ELISA检测外周血血浆中TGF-β浓度。结果(1)急性期KD患儿Treg细胞比例、抑制功能相关分子表达( CTLA-4、GITR、IL-10)、Foxp3蛋白及乙酰化水平显著降低( P<0.05),其中KD合并冠状动脉损伤组(KD-CAL+)前述各项均低于无冠状动脉损伤组(KD-CAL-,P<0.05),经IVIG治疗后明显恢复(P<0.05)。(2)急性期KD患儿Treg细胞乙酰化酶p300、TIP60表达及Foxp3结合水平显著下调(P<0.05),而去乙酰化酶 Sirt1表达及 Foxp3结合水平明显增加(P<0.05),且p300/Sirt1、TIP60/Sirt1表达比值与Foxp3蛋白乙酰化水平呈正相关关系(r=0.52、0.46； P<0.05),经IVIG治疗后均明显恢复(P<0.05)。其中KD-CAL+组p300、TIP60表达及Foxp3结合水平明显低于KD-CAL-组(P<0.05),而Sirt1表达及Foxp3结合水平则明显高于后者(P<0.05)。(3)急性期KD患儿血浆TGF-β及Treg细胞TGF-βRⅠ、EGR-1表达显著下调(P<0.05),而LKB1、pAMPK、NAMPT表达明显增加(P<0.05),其中KD-CAL+组前3项明显低于KD-CAL-组(P<0.05),而LKB1、pAMPK、NAMPT表达明显高于KD-CAL-组(P<0.05),经IVIG治疗后均有不同程度恢复(P<0.05)。结论 p300-TIP60/Sirt1表达失衡所导致的Foxp3蛋白乙酰化水平低下可能与急性期KD患儿免疫功能紊乱有关。