M2型巨噬细胞来源的外泌体对快速起搏HL-1细胞KCa3.1的作用及可能机制

目的 探究 M2 型巨噬细胞来源的外泌体对快速起搏小鼠心房肌细胞(HL-1)KCa3.1 的作用及可能机制.方法 提取C57/6J 小鼠骨髓巨噬细胞并分为未分化组(未加干预的骨髓巨噬细胞)和分化组(骨髓巨噬细胞经白细胞介素-4 干预 24h分化为 M2 型巨噬细胞).分别收集分化组和未分化组细胞培养液上清,采用超速离心法得到外泌体.实时荧光聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测 miR-146a-5p 在分化组和未分化组外泌体中的表达情况.将 HL-1 细胞分为 8 组,分别为对照组(HL-1 细胞未施加任何干预)、起搏组(HL-1 细胞快速起搏)、共培养组(HL-1 细胞快速起搏的同时与 M2 型巨噬细胞来源的外泌体共培养)、模拟物组(HL-1 细胞快速起搏同时转染miR-146a-5p模拟物)、模拟物对照组(HL-1 细胞快速起搏同时转染模拟物对照)、抑制物组(HL-1 细胞快速起搏同时转染 miR-146a-5p抑制物)、抑制剂物对照组(HL-1 细胞快速起搏同时转染抑制剂物对照)、PDTC组[HL-1 细胞起搏同时给予核因子-κBp65(NF-κB p65)特异性阻断剂 PDTC].采用 qRT-PCR 检测各组中 miR-146a-5p 相对表达量.免疫荧光检测共培养组中 HL-1 细胞对外泌体的摄取情况.蛋白质免疫印迹检测上述各组 KCa3.1 和磷酸化核因子-κBp65(p-NF-κBp65)的表达情况.全细胞膜片钳记录各组 KCa3.1 的电流密度.结果 与未分化组比较,分化组外泌体 miR-146a-5p表达量更高(P<0.01).与对照组比较,起搏组KCa3.1 和 p-NF-κBp65 蛋白相对表达水平和KCa3.1 的电流密度明显升高(P<0.001).与起搏组比较,共培养组和 PDTC 组 KCa3.1 和 p-NF-κBp65的蛋白相对表达水平和KCa3.1 的电流密度明显降低(P 均<0.05).与模拟物对照组比较,模拟物组 KCa3.1 和 p-NF-κBp65 的蛋白相对表达水平和KCa3.1 的电流密度明显下调(P 均<0.05).与抑制物对照组比较,抑制物组明显提高了KCa3.1 和 p-NF-κBp65 蛋白相对表达水平和KCa3.1 的电流密度(P 均<0.01).结论 M2 型巨噬细胞外泌体及其所携带的miR-146a-5p可能通过调控NF-κB信号通路进一步作用于快速起搏 HL-1 细胞中的KCa3.1.