新疆一枝蒿cDNA文库构建方法研究

目的:建立构建新疆一枝蒿cDNA文库的方法.方法:采用改良Trizol法提取一枝蒿幼嫩叶片总RNA,反转录成单链cD-NA,长距离聚合酶链反应法(LD-PCR)合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K消化,采用sfiⅠ酶切,酶切产物用CHROMA SPIN-400柱分级分离,回收0.4 kb以上的cDNA,以λTriplE×2噬菌体连接并进行体外蛋白包装,利用SMART技术构建一枝蒿全长cDNA文库;随机挑取文库中20个单克隆,电泳法测定原始文库滴度、文库容量、cDNA插入片段的重组阳性率与大小.结果:原始文库滴度为1.94×107 pfu/mL,库容量为0.97×107 pfu;cDNA插入片段重组阳性率为96%,大小为0.5~2.0 kb,平均为0.9 kb.结论:所构建的高库容、高质量的文库可为新疆一枝蒿cDNA文库的构建提供基础.