喉鳞状细胞癌SMAD3和hsa-miR-193b表达与靶向关系验证

目的 Hsa-miR-193b与LSCC的发生发展密切相关.本研究探讨LSCC中miR-193b与SMAD3的表达及二者的靶向调控关系.方法 qRT-PCR检测山西医科大学第一医院2013-01-03-2014-06-30来源的20例喉鳞状细胞癌(laryngal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及癌旁正常黏膜组织中miR-193b的表达,qRT-PCR、蛋白质印迹法检测SMAD3的表达.构建野生型和突变型SMAD3 3'UTR载体,与miR-193bmimics或NC共转染HEK-293T细胞,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性.结果 qRT-PCR检测结果,癌组织miR-193b总表达为11.50±6.289,癌旁正常组织为1.00±0.000,与癌旁正常组织相比,miR-193b在LSCC组织中的表达上调且差异有统计学意义,t=7.466,P＜0.001;癌组织SMAD3表达为0.402±0.201,癌旁正常组织表达为1.00±0.000,SMAD3在LSCC组织中的表达降低且差异有统计学意义,t=13.31,P＜0.001.蛋白质印迹法检测结果,癌组织SMAD3表达为1.57±0.127,癌旁正常组织表达为3.68±0.198,SMAD3在癌组织的表达降低且差异有统计学意义,t=48.40,P＜0.001.经测序,成功构建野生型与突变型SMAD3 3'UTR载体,共转染后各组样品经检测显示,miR-193b+ mutSMAD3组荧光素酶活性变化倍数为1.042士0.100 8,NC+ mutSMAD3组为1.102±0.070 6,差异无统计学意义(t=0.854,P=0.442),miR-193b+SMAD3组荧光素酶活性变化倍数为0.449±0.047 2,NC+ SMAD3组为1.124±0.014 1,miR-193b+SMAD3组比NC+SMAD3组荧光素酶活性明显降低(t=31.89,P=0.001),说明miR-193b可以与SMAD3 3'UTR结合.结论 LSCC组织中miR-193b表达上调,SMAD3表达明显降低.SMAD3是miR-193b的直接调控靶基因.