邻苯二酚-2,3-双加氧酶基因在芘降解菌基因组的整合与表达

为了构建能够稳定遗传且高效降解多环芳烃的工程菌,利用PCR技术对Pseudomonas songnenensis wp3-1的邻苯二酚-2,3-双加氧酶(C23O)基因进行克隆,并将其与自杀性载体pUTmini-Tn5连接,得到重组载体pUTmini-Tn5-C23O.在三亲接合作用下,经mini-Tn5转座子将重组载体pUTmini-Tn5-C23O中的C23O基因整合到菌株Pseudomonas sp.wp4的染色体DNA中,最终得到基因工程菌wp4-C23O.在不同pH、温度下,菌株wp4和工程菌wp4-C23O对浓度为50 mg· L-1的芘进行降解7d.2株菌降解最适温度为37℃、最适pH为7.5.在此条件下,工程菌wp4-C23O对芘降解率显著高于wp4菌株(P＜0.05),降解率提高11.45％.以PAHs降解优势菌株为受体构建工程菌可以去除石油污染土壤中的PAHs.