基于β-内酰胺酶构建大肠杆菌体内Aβ42聚集抑制剂筛选体系

淀粉样β蛋白(Aβ)的错误折叠和聚集是导致阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的主要原因,开发Aβ聚集抑制剂对于缓解和治疗AD至关重要.根据TEM1-β-内酰胺酶(TEM 1-β-lactamase,βlac)的结构特征及Aβ42的聚集特性,利用分子生物学方法将Aβ42插入到βlac 196-197氨基酸残基之间,构建了BL21-βlac-Aβ42重组菌株.利用已知Aβ42聚集抑制剂,分别通过斑点滴定实验、平板涂布实验和菌体浓度变化检测实验进行了验证.结果 显示,添加已知Aβ42抑制剂后,BL21-β1ac-Aβ42菌株在特定氨苄青霉素(ampicillin,Amp)浓度条件下生长状况得到改善,允许微生物细胞生长的最大细胞稀释倍数增大,证明该融合体系能应用于大肠杆菌体内筛选Aβ42聚集抑制剂.该研究实现了淀粉样蛋白聚集抑制剂在微生物体内的高通量筛选,为开发新型抗Aβ聚集药物奠定了基础.