基于CRISPR/Cas9系统的拟南芥ugt84a1/ugt84a2双突变体制作及突变位点分析

CRISPR/Cas9基因编辑技术相对于锌指核酸酶(ZFNs)和转录激活因子效应物核酸酶(TALENs)而言,具有操作简便、突变效率高等优点,已经被广泛应用于医学、动物科学、植物科学等领域.拟南芥糖基转移酶UGT84A1、UGT84A2参与植物次生代谢及外源毒物反应,并且为同工酶.本研究以拟南芥糖基转移酶同工酶基因UGT84A1和UGT84A2为靶向基因,构建CRISPR/Cas9双突变体表达载体,并转化到农杆菌浸染拟南芥,从而同时定向敲除靶向基因.根据拟南芥转基因后代的测序结果,对获得的42株阳性转化植株进行突变位点分析,结果表明,有2株阳性植株发生双突变,由此成功构建了ugt84a1/ugt84a2双突变体.试验结果可为加快ugt84a1/ugt84a2功能基因资源的开发利用提供有力的理论与方法支持.