25型蓝舌病病毒VP2蛋白的原核表达及鉴定

Shuangyu XIE,Xiao WU,Mingxin ZANG,Jiaxuan LI,Yigang XU,Yanping JIANG,Wen CUI,Yijing LI,Lijie TANG

Animal Husbandry & Veterinary Medicine（2017）

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摘要

为获得体外表达的25型蓝舌病病毒(BTV) VP2蛋白,本研究以NCBI上发表的25型BTV L2基因序列为模版,设计3对引物,PCR扩增3段部分重叠基因.将3段基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒.以1.0 mmol/L的IPTG诱导含有阳性质粒的重组菌pET-28a(+)-VP2-A/BL21、pET-28a(+)-VP2-B/BL21、pET-28a(+)-VP2-C/BL21进行表达,获得3段VP2蛋白,分别命名为VP2-A、VP2-B、VP2-C.经SDS-PAGE鉴定结果表明,重组蛋白以包涵体形式表达,大小依次为50 ku、48 ku、48 ku,与预期蛋白大小一致.经Western blot分析,VP2-A、VP2-B、VP2-C与His-Tag单抗发生特异性结合,证明其具有较好的反应原性.25型蓝舌病病毒VP2蛋白的分段表达为VP2蛋白的功能研究和制备蓝舌病的诊断试剂奠定了基础.

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