口疮病毒dUTPase基因的原核表达及亚细胞定位
Chinese Veterinary Science（2018）
Abstract
为了对口疮病毒(orf virus,ORFV)的dUTPase基因进行原核表达和亚细胞定位研究,本研究利用PCR扩增获得dUTPase基因,通过亚克隆获得重组表达质粒pET-32a-dUTPase和pEGFP-C3-dUTPase.pET-32a-dUTPase经IPTG诱导表达出dUTPase蛋白.蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清,并利用琼脂扩散试验检测其效价.pEGFP-C3-dUTPase转染BHK21细胞,利用荧光显微镜观察dUTPase蛋白的亚细胞定位.结果表明,dUTPase蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,分子质量大小约为35.7 ku,与预期相符.表达的dUTPase His融合蛋白能够与His标签的单克隆抗体发生特异性反应,具有良好的反应原性.琼脂扩散试验结果显示抗体效价为1∶8.真核表达的dUTPase蛋白在转染的BHK21细胞中主要分布在细胞质中.本研究结果为进一步研究dUTPase蛋白的功能奠定了一定的理论基础.
MoreAI Read Science
Must-Reading Tree
Example
Generate MRT to find the research sequence of this paper
Chat Paper
Summary is being generated by the instructions you defined