水牛卵母细胞成熟前后的差异蛋白质组的分析

本试验以水牛卵母细胞为研究对象,通过基于双向电泳-质谱技术的蛋白质组学研究手段,鉴定卵母细胞成熟前后表达量存在变化的蛋白质并进行验证.通过优化方法建立水牛卵母细胞蛋白质双向电泳分离的技术体系,通过双向电泳(2 DE)获得成熟前后的卵母细胞蛋白质电泳图谱,软件分析得到差异表达蛋白质,对差异蛋白质进行飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)分析,部分差异蛋白质合成抗体进行Western blot验证.结果表明,2组卵母细胞样品均获得约300个蛋白质斑点的双向电泳图谱.经ImageMaster软件比对分析,共发现在水牛卵母细胞成熟前后有27个差异蛋白质,其中表达上调15个,表达下调12个.将差异蛋白质斑点胶内酶解后用于MALDI-TOF/TOF飞行时间质谱鉴定,成功鉴定了6个蛋白质,包括主要穹窿蛋白(MVP)、热激蛋白60(HSP60)、Ras应答结合原件蛋白1(RREB1)等.Western blot结果表明,HSP60蛋白表达与双向电泳结果一致.本试验发现一批在卵母细胞成熟前后的差异表达蛋白质并进行表达量验证,推测HSP60蛋白可能在体外成熟时起到保护卵母细胞和物质转运的作用.