烟草中RNA基因沉默抑制子HC-Pro的表达及鉴定

农杆菌介导的遗传转化的生物技术已经被广泛应用.蚜传辅助因子(helper component-proteinase,HC-Pro)是一种RNA沉默抑制子,而HC-Pro蛋白对植物基因组DNA甲基化的影响及其作用机制并不十分清楚.我们采用农杆菌介导的烟草(Nicotiana benthamiana L.)叶盘转化法将外源基因HC-Pr转化烟草.并优化了各种侵染条件,包括农杆菌重悬液的浓度,选择培养基中卡那霉素的浓度和生根培养基中活性炭的比例.此外,我们介绍了一种简单而有效的生根技术,即水培生根法,并利用这种技术快速获得了HC-Pro转基因株系.半定量RT-PCR (Reverse transcription-PCR)检测结果表明,HC-Pro在转基因烟草及转基因后代植株中稳定表达,为HC-Pro蛋白功能的研究提供了实验帮助.