肿瘤细胞特异启动子hTERT介导的靶向mdr1基因的RNAi用于逆转卵巢癌细胞MDR的研究

目的：探索应用肿瘤细胞特异启动子hTERT介导靶向肿瘤多药耐药基因mdr1的siRNA在卵巢肿瘤细胞特异表达并逆转MDR的可行性。方法：应用携带luc报告基因的报告质粒验证了hTERT启动子在卵巢肿瘤细胞株A2780中的转录活性，构建由hTERT启动子引导的靶向mdr1基因的siRNA表达载体phTERT-siMDR1B，并与携带mdr1基因靶序列的报告质粒进行共转染抑制实验，进一步将phTERT-siMDR1B表达载体与mdr1基因表达载体共转染A2780细胞，检测细胞中mdr1基因的mRNA与P-gp蛋白的表达水平。以具有耐紫杉醇表型的A2780细胞作为靶细胞进行耐药评价实验。结果：hTERT启动子在卵巢肿瘤细胞株A2780中具有良好的转录活性，而在正常人二倍体细胞株MRC-5中无转录活性；hTERT启动子介导的siMDR1B具有良好的抑制效果与特异性；hTERT启动子介导的siMDR1B可显著抑制细胞中mdr1基因的mRNA与P-gp蛋白的表达水平；转染了hTERT启动子介导的siMDR1B表达元件的细胞对紫杉醇的耐药程度显著降低。结论：hTERT启动子介导的靶向mdr1基因的RNAi用于逆转卵巢癌细胞MDR是可行的，本研究结果可为进一步开展卵巢肿瘤MDR逆转研究提供重要基础。