泡沫细胞DNA甲基化及其对脂代谢基因SREBP1表达的影响

Shandong Medical Journal(2018)

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摘要
目的 探讨泡沫细胞DNA甲基化及其对脂代谢基因胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)表达的调控作用.方法 将体外培养的单核细胞系THP-1采用乙酸酯、氧化型低密度脂蛋白等处理后建立泡沫细胞模型,采用实时荧光定量PCR 法检测 THP-1 单核细胞和泡沫细胞中DNA 甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达,结果显示在THP-1泡沫细胞中DNMT1 mRNA相对表达量低于THP-1单核细胞(P<0.05),两种细胞DNMT3A、DNMT3B mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05),后续研究选择DNMT1基因进行转染.将THP-1泡沫细胞随机分为三组,对照组常规培养,空载体组转染空载对照质粒,DNMT1组转染DNMT1质粒,结果显示,DNMT1组DNMT1蛋白相对表达量高于其他两组,说明转染成功.收集三组细胞,采用质谱法检测SREBP1启动子甲基化状态,采用qRT-PCR和Western blotting法检测SREBP1 mRNA和蛋白表达.结果 与对照组及空载体组比较,DNMT1组SREBP1基因启动子区CpG岛22号CG位点启动子发生高甲基化,其他28个CG位点未发生甲基化. DNMT1 组 SREBP1 mRNA 和 SREBP1 蛋白相对表达量均低于其他两组( P 均 <0.05 ).结论 DNMT1表达降低参与泡沫细胞的形成;上调DNMT1可抑制脂代谢基因SREBP1表达;提示DNMT表达改变通过影响脂代谢基因SREBP1的甲基化水平可能在泡沫细胞形成中发挥重要作用.
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