大鼠骨髓间充质干细胞的分离、鉴定与冻存及对细胞活性的影响

目的 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),观察冻存对细胞活性的影响,为其临床应用奠定基础.方法 取3周龄SD雄性大鼠,断颈处死,取股骨和胫骨,提取骨髓MSCs进行体外培养,流式细胞仪鉴定细胞表面的阳性标记物和阴性标记物.所得骨髓MSCs-70℃ 冻存,分别于冻存前、冻存后1周、1个月、6个月取细胞,采用MTT法绘制骨髓MSCs增殖曲线,采用诱导实验检测骨髓MSCs的成骨细胞与脂肪细胞分化的能力.结果 分离大鼠骨髓MSCs表面标志物CD29阳性表达率为97.9％,CD90阳性表达率为97.4％.冻存后1周、1个月和6个月,大鼠骨髓MSCs复苏率差异无统计学意义(P>0.05).冻存、冻存时间延长对细胞增殖活力及多分化能力,经条件诱导后成钙结节数目和油滴数目组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 本实验成功提取了大鼠骨髓MSCs,配置的冻存体系也可较长时间保持MSCs活性,为其后继研究打下了基础.