MTT改良法检测胎盘口服液的生物活性

1 材料和方法 材料与仪器、胎盘提取物的制备、60Co照射灭菌及蛋白质含量测定等参见文献[1]. ①稳定性实验:60Co 3 kGy照射胎盘口服液,4℃保存6 mo,溶液的性状、细菌检查及蛋白质含量测定等均按2000版<中国药典>规定进行. ②胎盘提取物促进免疫细胞增殖的实验:实验分对照及实验2组,按文献[1,2]进行. 用不完全1640培养液调整细胞数为1×108*L-1,对照组加生理盐水100 μL,实验组加胎盘提取物100 μL,反应终浓度为5×10-2 g*L-1,做5批次. ③改良MTT检测:实验分原方法和新方法2组,参照文献[1-3]略加改进. 原方法组用不完全1640培养液调整细胞数1×108*L-1,每孔加细胞悬液100 μL,生理盐水100 μL,复孔×3,共做5例. 新方法组向每孔加2×108*L-1细胞悬液50 μL,生理盐水50 μL,复孔×3,轻轻混匀后置50 mL*L-1 CO2,37℃孵箱中培养24 h,无菌条件下向每孔加MTT溶液20 μL,轻轻混匀,继续培养4 h后加DMSO 100 μL,室温放置15 min,ELISA-reader参比波长630 nm,测定各孔A570 nm值. 共做5例.