小鼠原代胸腺上皮细胞分离方法的比较与优化

目的 比较几种小鼠原代胸腺上皮细胞(TEC)分离方法的效果,筛选简单、高效、实用的分离方法.方法 将小鼠胸腺组织根据所用的消化分离方法分为以下几组:胶原酶Ⅰ组 (Collagenase Ⅰ, Col IE组, 1 mg/ml)、DispaseⅡ组 (DisⅡ组, 3 mg/ml)、Col IE+低浓度DisⅡ组 (Col IE/Dis Ⅱ-L组, 0.75 mg/ml)、Col IE+中浓度DisⅡ组 (Col IE/Dis Ⅱ-M组, 1.5 mg/ml)、Col IE+高浓度DisⅡ组(Col IE/DisⅡ-H组, 3 mg/ml).优选出最适消化方法后,将所得单细胞悬液分成Percoll实验组以及Percoll对照组.采用血细胞计数板进行总细胞数计数,台盼蓝染色法观察细胞的活性;使用流式细胞术检测胸腺基质细胞(TSC)以及TEC的比例.结果 与单独使用DisⅡ与Col IE相比,Col IE与不同浓度Dis Ⅱ联合使用均能加快胸腺组织消化(P<0.01),获取单个胸腺的总细胞数较多,尤以中、高浓度DisⅡ与Col IE联合消化效果更佳(P<0.05或P<0.01).与单独使用酶消化组相比,Col IE与中、高浓度DisI联合消化均可不同程度地增加获取TSC和TEC的比例(P<0.01).与Percoll对照组相比,Percoll密度梯度离心进一步提高获取TSC和TEC的比例(P<0.05).此外,各种消化分离方法均可获得高活细胞率的细胞.结论 Col IE与DisⅡ联合消化,结合Percoll密度梯度离心可获取数量多、活性高的小鼠原代TEC.