三种荧光染料 SYBR GreenⅠ、LCGreen PLUS、EvaGreen在实时定量 PCR应用中的比较

目的：探讨定量PCR中三种荧光染料SYBR GreenⅠ、LC Green PLUS、EvaGreen定量效果的差异。方法以三个样品基因组DNA为模板，应用巢氏PCR法先扩增G6PDH大片段，纯化回收产物，定量，并分别以10倍、5倍和2倍倍比稀释，作为定量PCR制作标准曲线的模板。应用real－time PCR仪指定试剂盒检测模板质量，再分别以含有相同Taq酶并分别含有SYBR GreenⅠ、LC Green PLUS、EvaGreen染料的试剂进行小片段定量PCR扩增，每个浓度3复孔。标准曲线拟合，结果分析用仪器自带分析软件完成。结果应用三种荧光染料获得的标准曲线回归系数≥0．98（除1个样品为0．97），10倍、5倍梯度稀释标准曲线PCR效率为0．8～1．0，2倍稀释标准曲线PCR效率应用SYBR GreenⅠ有2／3样品＞1．2，而后两种染料为0．9～1．2。应用SYBR GreenⅠ较另两种染料的标准曲线误差较大，且样品间分散度也较大。结论在定量PCR中饱和染料LC Green PLUS、EvaGreen的定量效果好于SYBR GreenⅠ。