黑色素转铁蛋白重组慢病毒载体的构建及其在宫颈癌HeLa细胞中的功能验证

目的:构建黑色素转铁蛋白(melanotransferrin,MFI2)基因嵌入的慢病毒载体,上调宫颈癌HeLa细胞中MFI2表达水平,并探讨MFI2对HeLa细胞增殖的影响.方法:以HeLa细胞cDNA为模板复制扩增MFI2相应片段,并将该单边对应序列嵌入到慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen(pHAGE)质粒中构建pHAGE-MFI2重组质粒;将重组质粒与包膜质粒pMD2.G、包装质粒psPAX2协同转染入人胚肾上皮293T细胞,制备MFI2融合病毒,通过梯度稀释法检测病毒滴度.以MFI2融合病毒感染HeLa细胞,通过免疫印迹法检测MFI2标签在细胞中的表达量,采用CCK-8法及划痕实验评价上调MFI2表达量对HeLa细胞扩增能力的影响.结果:质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果均证实pHAGE-MFI2质粒构建成功;通过慢病毒三质粒协同包装系统成功构建MFI2基因融合慢病毒,病毒液滴度高达6×107 TU/mL;MFI2慢病毒感染HeLa细胞后,其MFI2的蛋白表达水平明显增高,而细胞增殖活力则显著降低.结论:MFI2高表达可有效抑制HeLa细胞增殖.