I1咪唑啉受体对α2A肾上腺素能受体表达和功能的影响

目的 在细胞水平研究I1咪唑啉受体(I1R)对α2A肾上腺素能受体(α2AAR)表达及功能的影响.方法 在完成小鼠I1R基因和α2AAR基因的质粒测序及酶切鉴定后,分别转染CHO细胞,采用放射性配体-受体结合实验、流式细胞分选技术进行阳性细胞单克隆筛选,建立分别稳定表达I1R和α2AAR的CHO细胞系,以及共同稳定表达I1R与α2AAR的CHO细胞系.采用放射性配体-受体结合实验确定α2AAR的亲和力及表达量,用Western印迹法研究I1R对α2AAR表达量的影响和对α2AAR激动剂右美托咪定刺激细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化作用的影响.结果 在转染小鼠I1R和α2AAR基因质粒后,CHO细胞生长正常.在为稳定表达小鼠α2AAR的CHO细胞膜蛋白所做的放射性配体饱和实验中,3H-RX821002的Kd和Bmax值分别为(0.96± 0.24)nmol/L和(0.29±0.03)nmol/g蛋白.在稳定表达小鼠I1R的CHO细胞以及稳定表达小鼠α2AAR的CHO细胞中再分别转染I1R基因后,I1R蛋白表达水平均明显上升(P<0.05,P<0.01).在共同稳定转染I1R和α2AAR的CHO细胞系中,I1R的表达上调了CHO细胞中α2AAR的表达水平(P<0.01),同时也进一步上调了右美托咪定激活α2AAR引起的ERK磷酸化水平(P<0.01).结论 在外源表达的细胞系中,I1R上调α2AAR蛋白的表达和右美托咪定激活α2AAR后的ERK磷酸化水平.本研究为后续分子水平深入探索I1R和α2AAR之间的相互作用奠定了基础.