颗粒蛋白前体通过促进细胞增殖和抗凋亡增强乳腺癌细胞对他莫昔芬的耐药性

目的:探讨颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)在乳腺癌细胞对他莫昔芬耐药性产生过程中的作用机制.方法:用4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen,OHT)处理乳腺癌细胞MCF-7和T47D以及他莫昔芬耐药性细胞MCF-7R和T47DR后,CCK-8法检测OHT对各细胞的半数抑制浓度(50％ inhibitory concentration,IC50).蛋白质印迹法检测各细胞中C-myc、Cyclin D1和Bc1-2蛋白的表达水平,CCK-8法检测各细胞的增殖能力,FCM法检测各细胞的凋亡率,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测各细胞中PGRN的mRNA和蛋白表达水平.采用脂质体转染法将特异性靶向PGRN基因的siRNA转染至他莫昔芬耐药性细胞MCF-7R和T47DR后,采用蛋白质印迹法检测PGRN、C-myc、Cyclin D1和Bc1-2蛋白表达水平的变化.进一步使用OHT处理干扰PGRN表达后的MCF-7R和T47DR细胞,再采用FCM法检测细胞凋亡的变化.结果:诱导获得的他莫昔芬耐药性人乳腺癌细胞株MCF-7R和T47DR的IC50值明显高于敏感细胞MCF-7和T47D (P值均＜0.001).耐药细胞MCF-7R和T47DR的增殖速度明显高于MCF-7和T47D细胞(P值均＜0.01),凋亡率明显低于MCF-7和T47D细胞(P值均＜0.01),增殖相关蛋白C-myc和Cyclin D1以及凋亡相关蛋白Bc1-2的表达水平明显升高(P值均＜0.01),PGRNmRNA和蛋白水平也明显升高(P值均＜0.05).干扰PGRN基因表达后,耐药细胞MCF-7R和T47DR中C-myc、Cyclin D1和Bc1-2的表达水平明显降低(P值均＜0.01),而OHT处理后细胞凋亡数量明显增多(P值均＜0.01).结论:PGRN在人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞中明显高表达,干扰PGRN基因表达可以增强乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性.