慢病毒介导YCD/5-FC自杀基因系统对白血病Jurkat细胞杀伤和旁观者效应

目的:探讨慢病毒介导的酵母菌胞嘧啶脱氨酶(yeast cytosine deaminase,YCD)自杀基因对人白血病Jurkat细胞的杀伤作用和旁观者效应.方法:制备YCD-GFP慢病毒上清,转染Jurkat细胞(即Jurkat/YCD-GFP细胞),流式细胞术检测YCD-GFP基因的表达.体外观察前体药物5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)对Jurkat/YCD-GFP细胞的杀伤情况和旁观者效应;建立Jurkat/YCD-GFP荷瘤小鼠模型,体内观察5-FC对移植瘤细胞的杀伤作用和旁观者效应.以上实验均以Jukut/GFP细胞为对照.结果:成功制备YCD-GFP慢病毒和感染YCD-GFP慢病毒的Jurkat/YCD-GFP细胞,YCD-GFP慢病毒对Jurkat细胞的感染率达96.93%.232 μmol/L的5-FC作用72 h可使(95.61±2.07)%的Jurkat/YCD-GFP细胞死亡,且上清中5-Fc含量下降80%左右.体外实验显示,Jurkat/YCD-GFP和Jurkat细胞效靶比1:10混合培养[(68.69±4.97)%vs(97.87±1.11)%,P<0.05)]和Transwell 1:25分层培养[(1.46±0.27)×10<'5>vs(3.00±0.16)×10<'5>,P<0.01]均存在旁观者效应.体内实验显示,YCD/5-FC自杀基因系统对Jurkat/YCD-GFP荷瘤小鼠亦具有较强的杀伤作用和旁观者效应(P<0.05).结论:慢病毒介导的YCD/5-FC自杀基因系统对人Jurkat白血病细胞具有显著的杀伤作用和旁观者效应.