RNA干扰Livin基因表达增强骨肉瘤MG-63耐药细胞对多柔比星的化疗敏感性

目的:研究凋亡抑制蛋白基因Livin在逆转骨肉瘤耐药中的作用.方法:应用多柔比星逐步诱导法诱导人骨肉瘤MG-63细胞建立耐药细胞株,MTT实验检测耐药细胞株的耐药指数,Westem blotting法检测MG-63细胞和耐药细胞中Livin蛋白表达的差异.构建Livin shRNA真核表达载体,应用LipofectmineTM 2000转染至耐药骨肉瘤细胞中,Real-time PCR和Westernblotting分别检测Livin shRNA转染前后MG-63耐药细胞中Livin基因和蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,MTT法检测对多柔比星化疗敏感性的变化.结果:成功构建重组质粒pSilencer3.1-H1 neo-Livin si.诱导的耐药细胞MG-63/R对多柔比星的耐药指数为81.32±5.33.Livin shRNA可抑制MG-63细胞中Livin基因和蛋白表达,明显低于空白对照组和非特异性转染组(分别下调72％和69％,P＜0.05).特异性转染Livin shRNA组MG-63/R细胞的凋亡率显著高于未转染组和非特异性转染组[(22.4±3.2)％vs(4.2±1.1)％、(4.7±0.6)％,P＜0.05].3组细胞在加入多柔比星后增殖均受到不同程度的抑制,且呈明显的时间-效应关系,但特异性转染组细胞的存活率均显著低于其他两组(P＜0.05).结论:应用RNA干扰技术下调Livin的基因表达可有效促进耐药MG-63骨肉瘤细胞的凋亡,从而增加其对化疗药物的敏感性.