RNAi沉默MCM7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤影响研究

目的 探讨微小染色体维持蛋白7 (miniehromosome maintenanceprotein7,MCM7)基因RNAi(RNA interference)的重组慢病毒载体,对人肝癌细胞SMMC-7721 MCM7基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响.方法 构建重组逆转录慢病毒载体MCM7-shRNA,以MCM7基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-shRNA-MCM7)感染SMMC-7721细胞,作为实验组;以对照慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC)感染SMMC-7721细胞,作为阴性对照组;空白对照组常规培养,不做任何处理.通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株.3组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型.观察裸鼠成瘤情况、移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;4周后测定肿瘤体积和质量,并用RT-PCR、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测移植瘤中MCM7的表达情况.结果 MCM7-shRNA慢病毒载体构建成功.裸鼠接种癌细胞后第6天均有肿瘤形成,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的肿瘤生长速度明显减慢,实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均体积分别为(27.72±7.80)、(81.86±10.91)和(79.75±16.61) mm3,差异有统计学意义,F=61.949,P＜0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均质量分别为(0.19±0.06)、(0.501±0.14)和(0.509±0.18)g,差异有统计学意义,F=18.41,P＜0.05.实验组MCM7 mRNA的相对表达量为0.253±0.198,阴性对照组1.213±0.548,空白对照组1.201±o.744,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=4.091,P＜0.05;实验组MCM7蛋白相对表达量为0.207±0.015,阴性对照组1.116±0.062,空白对照组1.088±0.040,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=292.778,P＜0.05.MCM7蛋白在阴性对照组和空白对照组中阳性表达率均为100％(10/10),在实验组中为30％(3/10),实验组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义,x2=18.261,P＜0.001.结论 慢病毒沉默SMMC-7721细胞MCM7基因表达能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,MCM7基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点.