荧光探针法研究阳离子多聚物基因载体Polybrene与DNA的相互作用

目的:用荧光探针法研究海美溴铵(PB)和DNA之间的相互作用.方法:将一定量的PB溶液逐渐加入到DNA/溴化乙锭(EB)复合物的水溶液中,在535 nm处激发,测定595 nm的荧光强度,观察体系荧光强度随PB浓度变化而发生的改变.用同样的方法观察PB对Hoe-DNA和4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)-DNA体系荧光强度的影响,Hoe的激发和发射波长分别设置为350 nm和460 nm,DAPI为340 nm和450 nm.通过荧光Scatchard分析法获得PB对DNA的结合常数.结果:随着PB浓度的增加,EB与DNA的结合减弱.通过对PB存在下EB-DNA体系的荧光分析,获得了PB与DNA之间的结合常数为1.8×10./mol.PB的加入大大提高了Hoe-DNA体系的荧光强度,同时Hoe的最大发射波长由最初的490 nm蓝移至460 nm.Hoe-DNA体系和DAPI-DNA体系的荧光强度均随着聚合物单体的浓度与DNA磷酸基团的浓度比值(N:P比值)的增加而增加,并且在N:P比值等于或接近1.0时达到最大.结论:DNA与PB之间复合物的形成减弱了DNA与嵌入剂的结合,但却能增强DNA和沟区结合探针之间的相互作用.提示PB与DNA的结合可能特异性地影响了DNA的二级结构.