糖尿病并发症相关基因醛糖还原酶酵母细胞模型的建立

目的构建由绿色荧光蛋白(GFP)标记的糖尿病慢性并发症相关基因醛糖还原酶(AR)表达载体,并在酵母细胞中表达,建立AR抑制剂筛选模型.方法构建AR与GFP的嵌合基因,将此AR::GFP嵌合基因克隆到酵母表达载体pYEX-BX中,再将重组载体pYEX-BX-AR::GFP转化至酵母宿主菌INVSC1,在SC-UD选择性培养基中表达AR::GFP.结果 PCR扩增出约1 106 bp大小片段,为AR基因片段;RT-PCR在酵母细胞中检测到AR mRNA的表达;经CuSO4诱导后可见AR::GFP融合蛋白的绿色荧光;诱导剂CuSO4终浓度在100～200 μmol/L范围内相对荧光强度较高,细胞密度适中;培养基SC-UD的pH值为6左右最适合细胞生长和荧光表达.结论 AR::GFP在酿酒酵母中成功地表达,酵母细胞是研究目的基因功能与表达的良好模式菌.