下调miR-196b靶向核凋亡诱导因子1调控肝癌细胞生长和凋亡的机制

目的 探讨miR-196b靶向核凋亡诱导因子1(NAIF1)调控肝癌细胞生长和凋亡的机制.方法 Real-time PCR检测miR-196b在肝癌细胞HuH-7、SNU-449、HepG2、SMCC7721和人正常肝细胞HL7702中的表达差异.取肝癌细胞HepG2,分成Con-trol(空白对照)、Anti-NC(转染inhibitor control)、Anti-miR-196b(转染miR-196b inhibitor)、si-NC(转染siRNA control)、si-NAIF1(转染NAIF1 siRNA)、Anti-miR-196b+si-NAIF1(共转染miR-196b inhibitor、NAIF1 siRNA)和Anti-miR-196b+si-NC(共转染miR-196b inhibitor、siRNA control)组,MTT测定增殖变化,平板克隆实验检测克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot检测Bax、C-caspase-3蛋白表达变化.靶基因预测软件预测NAIF1可能为miR-196 b的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系.计量资料两组间比较用t检验;多组间比较用单因素方差分析,进一步两两比较用SNK-q检验.结果 肝癌细胞HuH-7、SNU-449、HepG2、SMCC7721和人正常肝细胞HL7702中miR-196b表达水平分别为1.85±0.16、1.63±0.12、2.36±0.25、1.92±0.13、1.00±0.09,组间比较差异有统计学意义(F=29.05,P<0.001).与Anti-NC组比较,Anti-miR-196b组细胞中miR-196b表达水平(1.02±0.10 vs 0.42±0.03,P<0.05),细胞增殖(0.30±0.05 vs 0.20±0.02,P<0.05)、克隆能力(119.54±11.82 vs 64.35±6.97,P<0.05)均下降,细胞凋亡率[(4.26±0.35)％vs(22.30±2.09)％,P<0.05)]升高,细胞中Bax蛋白(0.30±0.05 vs 0.69±0.08,P<0.05)、C-caspase-3蛋白(0.21±0.04 vs 0.63±0.05,P<0.05)相对表达量增多.与si-NC组比较,si-NAIF1组肝癌细胞增殖能力升高(0.31±0.04 vs 0.46±0.05,P<0.05),克隆能力增加(118.47±8.38 vs 138.9±9.66,P<0.05),细胞凋亡率降低[(4.12±0.40)％vs(1.23±0.12)％,P<0.05],NAIF1(0.17±0.02 vs 0.10±0.01,P<0.05)、Bax(0.29±0.03 vs 0.18±0.02,P<0.05)、C-caspase-3(0.20±0.03 vs 0.12±0.01,P<0.05)蛋白水平也下降.与Anti-miR-196b+si-NC组比较,Anti-miR-196b+si-NAIF1组肝癌细胞增殖能力升高(0.21±0.03 vs 0.28±0.02,P<0.05),克隆能力增加(66.35±5.20 vs 97.12±8.23,P<0.05),细胞凋亡率降低[(21.14±1.32)％vs(9.60±1.11)％,P<0.05]NAIF1(0.52±0.06 vs 0.30±0.04,P<0.05)、Bax(0.67±0.06 vs 0.28±0.03,P<0.05)、C-caspase-3(0.60±0.04 vs 0.22±0.05,P<0.05)蛋白水平也下降.结论 下调miR-196 b靶向负调控NAIF1表达抑制肝癌细胞生长并诱导凋亡.