有机磷酸盐-与无机磷酸盐-钙化诱导培养基诱导主动脉瓣膜间质细胞钙化效果的对比研究

目的 比较有机磷酸盐(OP)-与无机磷酸盐(IP)-钙化诱导培养基(OIM)诱导主动脉瓣膜间质细胞(AVICs)钙化的效果.方法 主动脉瓣膜来源于2017年1—10月在第二军医大学附属长海医院行心脏移植的患者,取外观正常的主动脉瓣膜备用,采用改良的二次胶原酶消化法分离AVICs并随机分为A组和B组,A组采用普通培养基+OP-OIM进行培养,B组采用普通培养基+IP-OIM进行培养.采用茜素红染色检测钙化结节,采用邻甲酚酞络合酮比色法检测钙含量,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Runt相关转录因子2(RUNΧ2)、碱性磷酸酶(ALP)mRNA相对表达量,采用蛋白质免疫印迹法检测RUNΧ2蛋白相对表达量,采用对硝基苯酚比色法检测ALP活性.结果 (1)细胞免疫荧光检测结果显示,分离得到的细胞Vimentin阳性率接近100％.流式细胞术检测结果显示,分离得到的细胞CD31阳性率为1.17％.(2)A组细胞培养21 d可见大量橘红色钙化结节,B组细胞培养7 d可见大量橘红色钙化结节.A组细胞培养21 d和B组细胞培养7 d钙含量比较,差异无统计学意义(P>0.05).(3)以细胞培养0 d作为对照,A组细胞培养21 d与B组细胞培养7 d RUNΧ2 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);但A组细胞培养21 d与B组细胞培养7 d ALP mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05).(4)两组细胞培养0 d RUNΧ2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组细胞培养21 d与B组细胞培养7 d RUNΧ2蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05).(5)两组细胞培养0 d ALP活性比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组细胞培养21 d与B组细胞培养7 d ALP活性比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 IP-OIM培养7 d与OP-OIM培养21 d诱导的AVICs钙化效果相当,IP-OIM诱导AVICs钙化较OP-OIM缩短14 d,可替代OP-OIM快速有效地建立体外AVICs钙化模型.