酵母双杂交技术的影响因素及其实验策略
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS（2005）
摘要
目的为了研究蛋白质分子间的相互作用,以大T抗原和P53为阳性对照,建立酵母双杂交实验系统.方法通过比较共转化、顺序转化和交配实验三种方法的优劣,分析了影响酵母转化效率的因素,与此同时还分析了酵母体内β-半乳糖苷酶的活性.结果①顺序转化比共转化转化效率高;②质粒纯度是影响酵母转化效率的一个主要因素,与经典碱裂解法提取质粒相比,试剂盒提取质粒的转化效率明显高;③PEG浓度对转化效率也有一定影响;④β-半乳糖苷酶定量分析能够区分蛋白质分子间的强相互作用与弱相互作用,实验结果更可靠.结论在此基础上,我们提出了一种共转化与交配实验有机结合的有效的酵母双杂交新实验策略,并将之成功运用于筛选NGAL(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)相互作用蛋白实验.
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