基于实时荧光PCR的探针熔解曲线分析技术和反向点杂交技术应用于β-地中海贫血基因诊断与产前诊断的对比研究

目的 评价基于实时荧光PCR的探针熔解曲线分析(PMCA)技术作为β-地中海贫血(β-地贫)基因诊断和产前诊断方法的可行性.方法 收集2008至2010年在珠海市妇幼保健院经过血液学表型筛查初步诊断为轻型β-地贫的血标本119份、重型β-地贫血标本4份和正常血标本12份.此外,收集严重类型β-地贫高风险孕妇的羊水标本44份和脐带血标本8份.采用双盲法,采用PMCA技术和反向点杂交(RDB)技术对上述187份临床标本分别进行β-地贫基因突变检测,并以DNA测序技术作为金标准,对上述两种方法检测β-地贫基因突变的检测性能进行评估.结果 探针熔解曲线分析法除了漏检1例Ini( ATG＞ AGG)/N和1例不能区分为CD43(G ＞T)/N还是CD37(G ＞A)/(N-)外,其余的185份标本的β-地贫基因型均能正确检出；而RDB法有1例CD71-72(+T)/N未正确检出.以DNA测序技术作为金标准,探针熔解曲线分析法检测的敏感度、特异度、阴性预测值、阳性预测值和诊断效率分别为98.75％、100.00％、93.10％、100.00％、98.93％,RDB法分别为99.38％,100.00％、96.42％、100.00％、99.47％；两者间诊断效率的差异无统计学意义(P =0.999).且产前诊断的结果与胎儿出生或引产后血样的基因诊断或产后随访结果完全一致.结论 PMCA技术可作为RDB技术检测中国人群β-地贫基因突变的替代或验证方法.