骨肉瘤细胞中Plk1的表达和定位

目的 构建真核表达载体GFP-hPIk1并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位.方法 以pcDNA3.1-hPlk1为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk1基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1真核表达载体中.进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,提取细胞总蛋白进行Western blot 检测.同时利用激光共聚焦扫描显微镜观察GFP-hPlk1在U2OS细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hPlk1蛋白.结果 hPlk1基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-Cl中,Western blot检测到了GFP-hPlk1融合蛋白表达,分子质量Mr约为93 000Da.GFP-hPlk1在骨肉瘤细胞U2OS中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hPlk1蛋白.结论 成功地构建了GFP-hPlk1真核表达质粒,并在骨肉瘤细胞U2OS中表达.