cnot2基因是生物钟信号通路中的一个负向因子

目的：克隆表达并研究cnot2（CCR4-NOT转录复合体亚基2）基因在哺乳动物生物钟信号通路中的作用，为进一步研究生物钟信号通路提供理论依据。方法提取B6小鼠的总RNA进行体外反转得到cDNA。依据小鼠的基因序列设计合成一对特异性引物，以反转录的小鼠cDNA为模板，扩增得到cnot2的基因片段。将基因克隆到表达载体，转染HEK293T细胞系，获得总蛋白后通过Western blot检测该基因在体外是否成功表达。然后设计实验体系，收集细胞利用报告基因检测试剂盒检测per1-luc的活性，最后通过免疫共沉淀技术证明cnot2与主要生物钟基因之间的相互作用。结果 cnot2基因能够抑制哺乳动物生物钟基因bmal1和clock的转录活性，其可能的机制是cnot2能够竞争性地结合bmal1和clock，使bmal1-clock复合体的转录活性降低。结论 cnot2基因是生物钟信号通路中的一个负向因子。