阿糖胞苷在大鼠皮质神经元细胞培养中的适宜介入时间

背景:由于中枢神经系统疾病研究需求,实验室常用有毒性的阿糖胞苷获得纯度较高的神经元细胞,然而阿糖胞苷的介入时间鲜见研究.目的:验证终浓度为10μmol/L阿糖胞苷在大鼠皮质神经元原代细胞培养中的适宜介入时间.方法:采用神经元专用培养基Neurobasal+B27进行大脑皮质组织原代神经元培养,分别于接种细胞后12,24,36,48 h加入终浓度为10μmol/L阿糖胞苷.每48 h半量换液.于7 d后倒置的显微镜下观察神经元形态;采用免疫细胞化学的方法对神经元特异性烯醇化酶进行免疫化学染色,鉴定神经元细胞的纯度和成熟度;计算机多功能图像分析系统对所有神经元特异性烯醇化酶阳性细胞进行形态学计量分析.结果与结论:①接种细胞后24 h加入阿糖胞苷,神经元纯度在90%以上,分化成熟神经元细胞占比89.00%,神经元细胞胞体面积最大,突触最长,胞质透亮,核大而明显,细胞体周围折光性强,立体感强,突起三四个,具有三四级分叉,形成良好的网络结构,非神经元细胞较少,神经元纯度及细胞状态最佳;②结果表明,阿糖胞苷介入培养过程越早,神经元细胞纯度越高,但阿糖胞苷对神经元细胞分化成熟的影响也会越明显;采用neurolbasal培养基,于接种细胞后24 h加入阿糖胞苷,可以获得理想纯度,成熟度较好,生长状态较好的大脑皮质神经元.