人原代呼吸道上皮细胞体系分离人冠状病毒HKU1的方法及其复制特点

目的 建立分化良好的人原代呼吸道上皮细胞(HAE)培养方法,从北京地区重症肺炎患儿呼吸道样本中分离人冠状病毒HKU1(HCoV-HKU1)并对其复制特点进行初步分析.方法 采用气-液两相的方法诱导原代HAE细胞体外分化成假复层纤毛柱状上皮结构,接种经PCR方法鉴定HCoV-HKU1单阳性的北京儿童医院住院患儿鼻咽拭子样本,进行病毒的分离培养.通过荧光定量PCR与序列分析检测病毒复制动力与遗传稳定性.结果 HCoV-HKU1可在HAE中复制,产生有活性的子代病毒,细胞上清中的子代病毒在接种后96 h达到高峰.子代病毒在HAE传代过程中基因相对保守.结论 在国内首次采用人原代呼吸道上皮细胞从重症肺炎患儿呼吸道样本中分离到人冠状病毒HKU1毒株并确定其复制特性.