维生素 C 提高体外培养的去分化脂肪细胞心肌分化效率

目的：采用维生素C处理体外培养的去分化脂肪（ dedifferentiated fat，DFAT）细胞，以期进一步提高DFAT细胞的心肌分化效率。方法：用天花板贴壁培养法使大鼠成熟脂肪细胞去分化为DFAT细胞，并体外培养增殖至第3代，然后在培养基中添加维生素C或（和）乳鼠心脏细胞裂解液诱导DFAT细胞心肌分化。3周后，用倒置相差显微镜观察DFAT细胞的形态变化，用real－time PCR、免疫荧光和Western blot检测DFAT细胞的心肌特异性标志物cTnT、GATA－4及NKx2．5 mRNA和蛋白的表达。结果：大鼠脂肪细胞经天花板贴壁培养后形态转变为成纤维细胞样的DFAT细胞。 DFAT细胞在普通培养条件下可自发表达少量心肌特异性标志物。经乳鼠心脏细胞裂解液诱导后，DFAT细胞体积增大、变长，可见肌管样结构，cTnT、GATA－4及NKx2．5 mRNA和蛋白的表达水平较普通培养的DFAT细胞显著升高。在维生素C的作用下，DFAT细胞cTnT、GATA－4及NKx2．5的表达水平进一步升高。未观察到自发性搏动细胞。结论：维生素C可促进DFAT细胞分化为心肌样细胞。