pcDNA3.1(+)-NPM1真核表达质粒构建

目的 构建pcDNA3.1(+)-NPM1真核表达质粒,体外转染人膀胱移行细胞癌pumc-91细胞并观察其表达情况.方法 设计引物,采用PCR扩增核仁磷蛋白1(Nucleophosmin,npm1)基因编码序列;运用基因重组方法对其进行双酶切,插入pcDNA3.1(+)载体,经菌液PCR、测序对重组质粒进行鉴定.将成功构建的质粒经脂质体介导转染至pumc-91细胞,Western blot验证蛋白表达情况.结果 经菌液PCR、测序鉴定表明成功构建pcDNA3.1(+)-NPM1质粒,将成功构建的质粒转染至pumc-91细胞,Western blot证实转染pcDNA3.1(+)-NPM1表达质粒的pumc-91细胞npm1蛋白过表达.结论 成功构建pcDNA3.1(+)-NPM1重组质粒,为进一步研究NPM1蛋白的功能奠定基础.