弓形虫ROP21基因的原核表达与免疫学鉴定

目的 原核表达弓形虫棒状体ROP21基因,并对rROP21蛋白进行免疫学鉴定. 方法 根据已发表的ROP21基因序列设计引物,通过RT-PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP21基因.将ROP21基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)后转化大肠埃希菌BL21 (DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白,纯化后进行SDS-PAGE分析、Western blot及IFA分析. 结果 经PCR和酶切鉴定,成功构建重组表达载体.重组质粒转化BL21(DE3)后经IPTG诱导,重组蛋白(rROP21)以包涵体形式高效表达,分子质量单位约为45 ku.Western blot显示重组rROP21蛋白能被his标签抗体及弓形虫病患者血清识别.用rROP21免疫小鼠,获得滴度为1∶104的抗体血清.IFA显示弓形虫速殖子体内存在ROP21蛋白. 结论 构建的重组质粒pET28a ROP21表达的弓形虫rROP21具有抗性,可作为血清学诊断候选抗原,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.