miR-21靶向调节MARCKS基因影响人乳腺癌细胞多西紫杉醇敏感性的研究

目的:探讨miR-21对MARCKS基因表达的调控及其与乳腺癌MDA-MB-231细胞株多西紫杉醇耐药的关系.方法:通过基因芯片筛选到miR-21在亲代敏感细胞株(MDA-MB-23 1/S)与多西紫杉醇耐药细胞株(MDA-MB-231/Doc)中存在差异表达,应用实时荧光定量(RT-qPCR)方法验证此差异,同时分别检测MDA-MB-231/S细胞和MDA-MB-231/Doc细胞转染miR-21模拟物和抑制物后的表达变化;通过靶基因预测软件预测miR-21与MARCKS基因的关系;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、RT-qPCR和蛋白质印迹法检测miR-21表达变化对三阴性乳腺癌细胞多西紫杉醇耐药性的影响,并探讨其与MARCKS基因表达的关系.结果:与MDA-MB-231/S相比,miR-21在MDA-MB-231/Doc中的表达水平明显升高(2.03± 0.06)倍(P＜0.05).与阴性对照组比,MDA-MB-23 1/S细胞转染miR-21 mimics后miR-21表达水平明显增高(2.26± 0.07)倍(P＜0.05),而MARCKS基因在mRNA和蛋白水平上均明显下调.MDA-MB-231/Doc细胞转染miR-21 inhibitors后,miR-21表达水平是阴性对照组的(0.36±0.03)倍(P＜0.05),MARCKS基因的mRNA和蛋白水平高于其阴性对照组.转染miR-21 mimics后的MDA-MB-231/S细胞IC50显著高于其阴性对照组(P＜0.05),相反,与阴性对照组相比,MDA-MB-231/Doc细胞转染miR-21 inhibitors后,其IC50显著降低(P＜0.05).MDA-MB-231/S转染miR-21 mimics后,miR-21表达量明显上调,MARCKS基因分别是阴性对照组的(3.564± 0.336)倍和(2.019± 0.268)倍(P＜0.05).结论:miR-21可能通过靶向调节MARCKS基因增强乳腺癌细胞对多西紫杉醇的耐药性.