三种方法提取金黄色葡萄球菌DNA的比较

目的：对三种金黄色葡萄球菌DNA提取方法的效果进行比较，以期获得一种简便、经济的提取方法。方法采用改良SDS法、NP40法和细菌DNA试剂盒法分别提取同一浓度的金黄色葡萄球菌ATCC25923细菌DNA，利用NanoDrop 2000核酸检测仪测定核酸浓度和纯度，纯度用核酸在波长260 nm处的吸光值与在波长280 nm处的吸光值的比值A260／A280表示，用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量；提取不同浓度梯度的金黄色葡萄球菌 ATCC25923细菌DNA，PCR扩增16S rDNA片段检测并比较三种方法的灵敏度。结果三种方法提取金黄色葡萄球菌所得核酸浓度差异有统计学意义（χ2＝6．25，P＜0．05），NP40法提取浓度较高，改良SDS法较低。试剂盒法提取的DNA纯度较高， A260／A280值在1．8～2．0之间；NP40法提取纯度较差；DNA电泳结果表明SDS法和TIANGEN试剂盒法提取的DNA条带清晰，无拖带现象，NP40法未出现DNA主带，且有拖带现象。所有方法所得DNA经PCR扩增均出现阳性条带。NP40法提取DNA的PCR检测敏感度最高，为1．5×106 cfu／ml，改良SDS法敏感度最低，为1．5×108 cfu／ml。结论 NP40法提取DNA成本低，耗时少，灵敏度高，适用于金黄色葡萄球菌的快速初筛。