华支睾吸虫磷脂酶B和HBx蛋白对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨华支睾吸虫分泌排泄蛋白磷脂酶B(CsPLB)与乙肝病毒(HBV)X蛋白(HBx)共同作用对HepG2肝癌细胞株增殖、凋亡的影响.方法 使用不同浓度的重组CsPLB (rCsPLB)刺激本课题组已构建的转染了融合表达HBx慢病毒载体的HepG2细胞(HepG2-plvo-HBx),以转染空白慢病毒载体的HepG2(HepG2-plvo)作为对照细胞.使用CCK8测定细胞的增殖水平,流式细胞术分析细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞凋亡相关因子B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬蛋白酶(Caspase)家族中Caspase 3和Caspase 9的蛋白表达水平.结果 CCK8实验结果显示,经过rCsPLB刺激后,HepG2-plvo细胞增殖水平显著下调,HepG2-plvo-HBx细胞增殖水平显著上调,在rCsPLB浓度为5μg/mL时,细胞增殖能力最强,与PBS组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).Annexin VAPC/7AAD荧光双染检测结果显示,HepG2-plvo细胞凋亡比例(8.07±3.93)％,低于PBS组的(14.50±0.73)％,差异有统计学意义(P＜0.01);HepG2-plvo-HBx凋亡细胞占比(15.55±1.92)％,高于PBS组的(9.57±2.52)％,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示,HepG2-plvo细胞中Bcl-2的蛋白表达水平高于PBS组,Bax和Caspase 3的蛋白水平低于PBS组,差异有统计学意义(P＜0.05),Caspase 9蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);与PBS组相比,HepG2-plvo-HBx细胞中Bcl-2蛋白表达水平下调,Bax、Caspase 3和Caspase 9蛋白表达水平上升,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 rCsPLB与HBx共同作用可促进HepG2细胞的增殖和凋亡.